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細(xì)胞株的不同轉(zhuǎn)染方式有何區(qū)別?

原載自:www.diomay.cn[行情動(dòng)態(tài)]  2022-09-12  瀏覽次數(shù):1111

   細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技能。隨著基因與蛋白功用研討的深化,轉(zhuǎn)染目前已成為試驗(yàn)室工作中常常涉及的根本辦法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過(guò)物理辦法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)辦法許多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染辦法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技能;生物介導(dǎo)辦法,有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技能。
  細(xì)胞株轉(zhuǎn)染時(shí)的瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)區(qū)別是什么?
  瞬轉(zhuǎn)即瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,是指將外源質(zhì)粒通過(guò)某種方式導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)得以表達(dá);
  穩(wěn)轉(zhuǎn)即病毒感染,是利用慢病毒將外源插入整合到宿主細(xì)胞的基因組,從而達(dá)到持久性表達(dá)。
  由此可見,二者的區(qū)別即:
  穩(wěn)轉(zhuǎn)是基因組整合到宿主細(xì)胞基因組,跟隨細(xì)胞一起增值得以穩(wěn)定遺傳;
  瞬轉(zhuǎn)是質(zhì)粒游離在細(xì)胞內(nèi),一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,但不能穩(wěn)定遺傳。
  細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備:
  1.將400ul去核酸酶水參加管中,震動(dòng)10秒鐘,溶解脂狀物。
  2.震動(dòng)后將試劑放在-20℃保存,使用前還需震動(dòng)。
  3.挑選適宜的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體體積:DNA質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中參加適宜體積的無(wú)血清培育基。
  4.將混合液在室溫放置10-15分鐘。
  5.吸去培育板中的培育基,用PBS或者無(wú)血清培育基清洗一次。
  6.加混合液,將細(xì)胞放回培育箱中培育一個(gè)小時(shí)。
  7.到時(shí)后,依據(jù)細(xì)胞品種決議是否移除混合液,之后參加*培育基持續(xù)培育24-48小時(shí)。

 

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